多肽设计简介
粗品多肽
药物传递
抗体生产
药物发现
疫苗研发
组织工程
核磁研究
蛋白相互作用研究
酶分析研究
siRNA传递研究
磷酸化抗体
非商品化抗体
抗菌药物
癌症药物研究(GPCR激动剂)
糖尿病药物研究(GIP and GLP-1激动剂)
神经退化疾病药物
艾滋病疫苗研发
癌症疫苗研发
流感疫苗研发
人乳头瘤病毒疫苗研发
水凝胶研究
干细胞研究
伤口愈合研究
电荷的影响：
溶解性
多肽活性
对盐的结合能力
电荷取决于电离基团：
N端氨基，C端羧基
侧链R基，如Asp, Glu, His, Cys, Tyr, Lys, Arg
解性关系的关键因素：pH/pI：
pH= pI: 溶解度最低，沉淀
pH< pI: 净正电荷
pH> pI: 净负电荷
成盐关系的关键因素：
Lys, His, Arg容易跟TFA, AcOH, HCl结合
Lys, Arg容易结合水分子
疏水多肽的特性为：
长度>5个氨基酸
序列包含50%以上的疏水氨基酸
如果抛开多肽合成的过程，但从设计的角度来说，可以设计任意长的多肽，但是由于多肽固相合成的特点，长度越长，多肽合成的难度越大，合成出来的多肽的纯度越低，副产物也越多，纯化难度增大，往往会导致多肽在合成阶段就失败了，因此实验也无从进行，一般来说，多肽长度在15-20个氨基酸是适中的，长度在30个氨基酸以内的多肽基本都可以正常合成，如果超过40个氨基酸的多肽，合成成功率会下降很多。
一般来说，相同序列和修饰、相同数量的多肽会因为其纯度的不同而价格各异，纯度越高，单位质量的多肽价格也越高。鸿肽生物可以提供粗品、脱盐，70%到99%不同纯度级别的多肽供客户按需选择使用。 各种多肽纯度及应用范围如下：
大规模功能性筛选
肽微阵列
作为制备抗体的抗原
层析法
酶联免疫吸附试验检测抗血清滴度
免疫印迹法（非定量）
酶底物肽（非定量）
封闭肽（非定量）
亲和纯化
磷酸化检测
蛋白电泳的应用和免疫细胞化学
标准酶联免疫吸附试验和RIA（定量）
受体配体相互作用（定量）
体内、体外 生物学测定
酶的研究和阻断实验（定量）
NMR研究
质谱分析
其他定量检测
SAR研究
临床试验
APIs(药物活性成分)
工业品
X-ray晶体研究
其他敏感的实验：酶与底物、受体与配体相互作其他定量检测
粗品多肽
>70%和>75%的多肽
>80%，>85%和>90%的多肽
>95%的多肽
>98%的多肽
外肽酶(例如氨肽酶，carboxypeptidases): 多肽对外肽酶的稳定性与多肽N-端氨基酸有相关性：
长半衰期氨基酸: Met, Ser, Ala, Thr, Val, or Gly；
短半衰期氨基酸：Phe, Leu, Asp, Lys, or Arg；
内肽酶(如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶，胰肽酶E)
对内肽酶敏感的多肽特征为：富Pro, Glu, Ser和Thr区域；
降低降解的策略: 环化，N端乙酰化，C端酰胺化，使用D型氨基酸替换对应氨基酸，拟肽，订书肽成环。
肾清除的特征：1) <25 kDa的亲水多肽很容易被肾小球快速过滤清除；2）多肽不容易被肾小管被重新吸收。
降低肾清除的策略：将多肽偶联到大分子或者聚合物上如：聚乙二醇(PEG)，多聚唾液酸(PSA)，羟乙基淀粉(HES)，牛血清白蛋白(BSA)，脂肽修饰等。
氧化的症状：
经过一段时间多肽活性降低或者消失；
多肽颜色发生改变，从白色变为黄色，棕黄色或者棕色。
容易氧化的多肽：包含Cys, Trp, Met氨基酸的序列。
预防措施：
设计优化：使用Ser代替Cys，使用Nle代替Met。
多肽存储保护：将多肽分装（可以避免反复分装）；将多肽用氩气保护并将多肽储存于密闭容器中。
多肽分析时保护：添加还原剂(抗氧化剂)：DTT, TCEP, β-mercaptoethanol；使用氩气保护缓冲液；在无氧室中使用充氩水置换缓冲液和多肽；在无氧环境中进行分析。
多肽溶解性差的症状：
多肽溶解后浑浊或者有沉淀
多肽溶解性差的序列：序列长度>5AA且包含Trp, Phe, Tyr, Met, Ile, Leu, Val超过50%的多肽序列。
多肽溶解性差的解决办法：
溶解的时候遵循溶解指南;
合成多肽的时候要求做溶解性测试;
使用极性或者带电荷氨基酸替代非必要疏水氨基酸;
引入O-酰基基团(如PEG);
引入亲水性Linker(如：Lys-Lys-Lys-Lys);
对于肽库可以进行移码;
多肽存储不当的症状：
经过一段时间多肽活性降低或者消失；
冻干多肽从粉末状转变为晶体状；
容易受影响序列：包含Ser，Thr，Lys，Gly，Arg氨基酸的多肽序列。
解决办法：
将多肽分装（可以避免反复分装）;
将多肽存储于-20℃避光干燥处；
避免反复冻融；
对于所有多肽
对于包含Cys, Met, 或者Trp的多肽
对于包含Asp, Glu, Lys, Arg, 或者His的多肽
对于必须保存于溶液中的多肽
要根据实验需求实现分装;
要避免反复冻融;
要尽量避免将多肽暴露于空气;
要尽量用氩气或者氮气保护多肽或者缓冲液;
要用密封性好的容器保存多肽;
要尽量避免将多肽暴露于空气;
要将多肽保存于干燥皿器中;
要用密封性好的容器保存多肽;
要避免反复冻融;
要根据日常实验需求将多肽溶液一次分装好;
要用无菌溶剂溶解多肽;
要用0.2 μm的滤膜过滤去除多肽中的细菌污染;
TFA平衡离子污染症状：
不稳定的细胞或者组织活性以及酶分析结果；
IR图谱结果；
质谱响应降低；
多肽降解；
容易产生TFA平衡离子污染的序列：所有的序列，特别是包含带有正电荷的氨基酸Lys, His, Arg的多肽序列。
解决办法：
选择TFA去除服务或者脱盐处理;
生物污染症状：
内毒素污染；
产生不需要的免疫反应；
容易产生生物污染的序列：所有的序列。
解决办法：
选用内毒素去除服务;
在无菌罩中打开多肽容器;
