二硫键成环技术
空气氧化法形成二硫键是多肽合成中最经典的方法,通常是将巯基处于还原态的多肽溶于水中,在近中性或弱碱性条件下(PH值6.5-10),反应24小时以上。为了降低分子之间二硫键形成的可能,该方法通常需要在低浓度条件下进行。
将多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中,逐滴滴加10-15mol/L的碘进行氧化,反应15-40min。当肽链中含有对碘比较敏感的Tyr、Trp、Met和His的残基时,氧化条件要控制的更精确,氧化完后,立即加入维生素C或硫代硫酸钠除去过量的碘。
序列中的Cys之间随机成环,与一对二硫键成环条件相似;
定点成环即序列中的Cys按照设计要求形成二硫键,反应过程相对复杂。在固相合成多肽之前,需要提前设计几对二硫键形成的顺序和方法路线,选择不同的侧链巯基保护基,利用其性质差异,分步氧化形成两对或多对二硫键。通常采用的巯基保护基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob, Meb、TMTr、Npys等多种基团。
二硫键成环合经验丰富,合成策略多,技术成熟
严格的质量检测,包括质谱检测和HPLC检测,对于多对二硫键成环,每个位点成环都将提供质谱验证报告
纯度>95%