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哺乳动物蛋白表达

鸿肽生物哺乳动物蛋白表达服务,蛋白产量可从毫克级到达克级,细胞培养密度可达 2-4×106cells/ml。鸿肽哺乳动物蛋白表达服务包括:瞬时转染表达,稳定细胞株构建表达,以满足您科研工作的不同需求。
哺乳动物细胞表达步骤及交付标准
1. 项目分析出具蛋白表达方案
周期
交付数据及材料
  • 密码子优化

  • 融合标签

  • 纯化方案

  • 可优选宿主细胞

1-2工作日

  • 项目预实施报告

2. 表达体系系统选择
可选表达载体
pAZ-V5相关系列载体(分泌型、可选His-tag)
其他商业化的载体
可选表达宿主
HEK293系列细胞 CHO系列细胞 (根据不同要求,我们会选择贴壁型或悬浮型的细胞完成实验) 其他商业菌株
3. 表达载体构建
周期
交付数据及材料
A. 基因优化及基因合成
B. 亚克隆至真核表达载体中
C. 无内毒素质粒抽提
基因合成:2周左右
亚克隆:1-2周
1、基因合成报告
2、测序验证报告
3、包含表达质粒的大肠杆菌DH10
4、表达质粒
4. 瞬时转染小试
周期
交付数据及材料
D. 细胞瞬时转染
E. 表达小试
F. 表达分析鉴定(WB)
细胞转染: 1周
表达鉴定: 1-2周
表达分析报告
5. 表达及纯化
周期
交付数据及材料
G. 扩大
H. Ni柱亲和纯化
I. 重组蛋白鉴定检测
表达鉴定: 1-2周
蛋白样品 (以实际得率为准)
6. 放大培养及蛋白纯化
周期
交付数据及材料
J. 放大培养(根据具体需求量)
K. Ni柱亲和纯化
L. 纯度鉴定(PAGE)
L. M.蛋白分装发货
放大培养:2-3周
表达纯化:1-2周
1、蛋白纯度鉴定报告
2、成品蛋白
(具体量依据小试表达水平拟定)

补充说明

1、不同的蛋白表达量差异很大,我们在小试阶段会交付尽可能多的目的重组蛋白。
2、正常情况下,我们使用Mouse-Anti-His抗体检测重组蛋白,如果选择不带标签,请提供特异性的抗体用于WB检测。
3、如果选择不携带任何标签,我们可以使用AKATA蛋白纯化设备分离目的蛋白,但是纯化费用会增加。
4、即使蛋白不表达或表达量极低,我们无法获得目的蛋白,我们也会提供全套的实验流程和原始照片。