1. 项目分析出具蛋白表达方案
周期
交付数据及材料
2. 表达体系系统选择（客户提供表达菌株的略过此步骤，仅提供表达质粒的可选择需要电转化的表达菌株）
2.1 可选表达载体
GAP启动子载体：pYE-GAPα，；
常规商业化载体：分泌表达：pPICZαA、pPIC9K，
胞内表达：pPICZA、 pPIC3.5K
2.2 可选表达菌株
GS115，X33菌株
SMD116蛋白酶缺失型菌株
A. 基因优化
亚克隆设计
合成基因
B. 亚克隆至载体
C. 质粒中抽及线性化-10ug
基因合成：2周左右
亚克隆：1-2周
线性化 ：2-3天
1、基因合成报告
2、测序验证报告
3、包含表达质粒的大肠杆菌DH10
4、表达质粒
5、线性化检测图片
D. 电击转化
E. 阳性克隆子筛选（PCR法）
F. 高拷贝菌株筛选（可选）
G. 表达小试（5-10菌株）
H. 表达分析鉴定（WB）
I. 定株，优化表达条件
电转化及鉴定: 1-2周
高拷贝筛选: 2-3周（可选）
表达小试及鉴定: 1-2周
6、阳性表达菌株
7、PCR鉴定阳性菌株图
8、高拷贝阳性菌株（可选）
9、小试表达流程报告
10、WB实验结果
11、小试表达总结
5. 毕赤酵母蛋白纯化及鉴定
周期
交付数据及材料
J. 放大培养2-5升
K. 表达上清液浓缩
L. Ni柱低压亲和纯化
M. PAGE分析纯化过程
N. WB鉴定纯化后蛋白
O. PFM检测（可选）
P. MS检测（可选）
放大培养: 2-3周
蛋白纯化: 1-2周
WB: 1周
PMF: 2-3周
MS: 1-2周
12、蛋白纯化流程报告
13、蛋白纯化原始图片
14、发货蛋白
15、Western Blot（标签抗体）
16、蛋白指纹图谱（可选）
17、蛋白质谱分子量（可选）
补充说明
1、毕赤酵母细胞对密码子偏爱性要求较高，建议进行基因优化后再进行表达以提高成功率。
2、正常情况下采用分步收费原则来收取费用，特殊订单承诺不成功不收费。
3、不同的蛋白表达量差异很大，我们会尽量提供mg级别以上的蛋白量给客户。
